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应用研究
浅析医院输液制剂细菌内毒素的控制及检测注意事项
Date: 2017-07-19 15:45:20
叶良君，张涛（武警湖南总队机关门诊部，湖南长沙 410008）
编者注：医院制剂曾经对我国的医药健康事业作出了突出贡献，目前伴随着国家医药体制改革，医院制剂已经慢慢退出了历史的舞台。本文作者长期使用我公司产品，在工作中，积极探索，将工作中遇到的问题和个人工作经验进行一次归纳总结，并将其整理为论文发表于《齐鲁药事》2007年26卷第12期。本文对广大从事细菌内毒素检查的工作者具有相当的参考价值，故予以转载，在此对叶良君等老师在工作中给予的支持表示衷心感谢！
摘要： 要使医院输液制剂安全有效地应用于临床，保证患者的用药安全，医院制剂室必须确保输液制剂细菌内毒素限量检测合格。而输液制剂的生产是一个极其复杂的过程，任一环节的操作不当都有可能导致细菌内毒素的检测不合格。为了提高医院输液制剂的质量，必须加强配制工艺中各环节细菌内毒素的控制，强化原辅料、注射用水、半成品和成品等的内毒素的检测，完善和改进检测方法，提高检测水平和质量。
关键词： 医院输液制剂；细菌内毒素；控制；检测注意事项
《中国药典》2005版(二部)(下称药典)规定，常用输液制剂的热原控制均可以使用细菌内毒素检查法。为了全面控制医院输液制剂的细菌内毒素，笔者从生产工艺各环节细菌内毒素的控制措施、细菌内毒素的检测和检测注意事项分别加以探讨和研究。
1 输液制剂配制生产工艺中细菌内毒素的控制
1.1 注射用水的细菌内毒素的控制
我院（总队医院）系使用不锈钢活性炭过滤器、精密过滤器、电渗析器、离子交换树脂床、多效蒸馏水机这一组合装置制备注射用水。为了对注射用水的细菌内毒素加以控制，我院（总队医院）制剂室主要采取了如下措施：①定期对活性炭过滤器、精密过滤器、电渗析器、离子交换树脂等进行维护和再生。②不定期检查多效蒸馏水机的疏水阀是否堵塞，保证疏水阀的畅通。③制水时，实时监控蒸汽压力、去离子水流量和冷却水流量，确保三者的相对平衡。④加强对料水和终水的电导率的监测，其电导率应控制在低于1.0μs/cm，同时保证终水的温度在90℃以上。⑤质检室对注射用水每月进行一次质量全检，批批执行常规检测，其中细菌内毒素为必检项目，一旦发现问题，及时查找原因和改进。
1.2 原辅料的细菌内毒素的控制
为了确保原辅料的质量，必须坚持主渠道和定点采购，坚持质量抽检制度，同时保证储藏条件，防止原辅料被污染。对于氯化钠原料，因含有较多的有机杂质，可于配制前将氯化钠置180℃干烤2.0h或250℃干烤1.0h，均能有效地除去细菌内毒素。
1.3 输液制剂配制过程中细菌内毒素的控制
配制前应对所有器具、管道和配件充分清洗或清洗后消毒。消毒灭菌时，应充分保证消毒时的蒸汽压力、消毒温度和时间,温度和时间不够同样能导致细菌内毒素检测不合格。输液制剂的细菌内毒素主要依赖活性炭的吸附来去除，因此，操作者要注意活性炭的使用量，并且根据原辅料的污染程度及活性炭在储存中因吸潮后吸附力下降的状况进行调整。活性炭如吸潮，可在使用前经120℃干烤2.0h即可。同时要严格控制活性炭的采购质量，避免因使用劣质活性炭而导致输液中细菌内毒素限量超标的情况发生。在抽滤及药液回流、灌装过程中，不要随意停泵和松泵，以免破坏活性炭助滤层而降低活性炭主动吸附内毒素的能力。
1.4 微孔滤膜的处理方法对输液制剂细菌内毒素限量的影响
在生产实践中发现，微孔滤膜如处理不当可引起细菌内毒素的污染，严重影响输液的质量。研究表明：混合纤维素酯微孔滤膜对细菌内毒素呈现可逆性的吸附作用，并且须用大量的注射用水或药液冲洗才能逐渐清除。因此，在浸泡微孔滤膜时，应尽量缩短浸泡时间，防止浸泡用注射用水在浸泡过程中产生细菌内毒素。否则，会使灌装初始阶段的输液制剂细菌内毒素限量不合格。为此，笔者建议改用荷电微孔滤膜代替混合纤维素酯微孔滤膜。这是由于荷电微孔滤膜带正电荷的特性，而细菌内毒素带负电荷，当含有内毒素的药液通过滤膜时，内毒素被吸附而除去[1]。
2 输液制剂细菌内毒素的检测注意事项[2]
目前，医院质检室对输液制剂细菌内毒素的检测还是以凝胶法为主，操作者在严格按照药典的规定正确操作的同时，还应注意以下事项。
2.1 应购买符合药典规定的灵敏度的鲎试剂，适宜单位的细菌内毒素工作标准品。为保证实验结果的稳定性和可靠性，笔者认为最好选用同一厂家生产的鲎试剂、细菌内毒素工作标准品和检查用水。
2.2 实验前应仔细检查标准品的批号和效期。因不同批号的细菌内毒素标准品实验结果不尽相同，所以在更换细菌内毒素标准品时，应对灵敏度进行复核，以确保实验结果的准确性。另外，在所有实验中，各实验所要求的对照应同时进行，不能为了节约成本和减少实验环节，不做或择做实验对照。所有实验应在对照反应有效的条件下，才能进行计算和结果判断。
2.3 实验用玻璃器具在用洗涤剂和自来水洗净并控干水分后置洗液中浸泡4h，清洗后于250℃干烤1h或180℃干烤2h，烤好的器具，在不开启金属容器的情况下，可在两周内使用，否则须再次加热除去可能存在的外源性内毒素。注意最后冲洗器具时，应用新鲜蒸馏水冲洗，禁用纯化水和久置的蒸馏水。
2.4 在鲎试剂复溶和加入供试品后，应轻轻振动混匀，以免出现挂壁滞留和试管(安瓿)壁的吸附作用造成剂量不足而出现假阴性。鲎试剂复溶时应注意将细菌内毒素检查用水沿着试管(安瓿)壁加入，避免产生过多泡沫。在反应尚未完成时，不应取出观察，同时放置恒温水浴箱的台面应保持平稳，保温和拿取试管(安瓿)的过程中应避免受到震动，否则有可能出现假阴性的结果。保温期间，温度变化大小也会直接影响实验结果，因此，恒温水浴箱的温度波动应小于1℃。另外，应定期校准恒温水浴箱的温度计，以确保温度显示的真实性。在整个实验过程中，要避免任何有可能产生污染的情况发生，以免假阳性结果的出现。
2.5 操作时间的长短、环境温度的高低都会影响实验结果。在进行实验时，操作者动作要迅速，尽量缩短操作时间。同时由于反应温度为37℃±1℃，而夏天的气温有时高达38～40℃，超过反应温度，为了避免阳性对照出现“不凝胶”的现象，此时应考虑安装空调控制室温[3]。
2.6 用细菌内毒素检查用水溶解制成的细菌内毒素标准原液，用封口膜封口后，要保存于4℃环境下，2周以内效价不会降低，但这只适用于细菌内毒素国家标准品，如是细菌内毒素工作标准品，最好一次用完，不再保存[4]。
2.7 研究表明，鲎试剂与内毒素反应并非特异性反应，一些非内毒素物质如β-葡聚糖，能激活鲎试剂凝集系统中的G因子，发生凝集反应。真菌细胞壁以及某些中空纤维的滤器及滤材中均含有β-葡聚糖。因此，在输液生产及细菌内毒素检测过程中，应防止受到微生物和纤维素类物质的污染，以免出现假阳性结果[4]。同时，在实际工作中，应加以鉴别，避免误判结果。当然，可以在实验中使用特异性鲎试剂弃G因子鲎试剂或在实验中加入G因子抑制剂来消除干扰。
3 讨论
医院输液制剂的细菌内毒素的控制贯穿于整个输液生产和细菌内毒素检测过程中，这就要求不但要不断提高医院输液制剂的生产水平，改进生产工艺和提高操作技能，而且要充分利用细菌内毒素检查法这一监督手段，对医院输液制剂生产各环节的细菌内毒素加以控制。同时应不断完善和更新检测方法，提高检测水平和质量。加强对光度测定法即定量法的研究和使用，进一步提高输液制剂细菌内毒素限量的控制标准，为临床提供更安全有效的输液制剂。
参考文献
[1] 龚承元，苏建勇，朱孟府.荷电微孔滤膜的制备及其性能的初步研究[J].中国药学杂志，1994，29(4)：214-216.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)[M].北京：化学工业出版社，2005：附录85-88.
[3] 田光彩.用鲎法检查内毒素阳性对照出现“不成胶”现象浅析[J]，中国药师，2004，7(3)：234-235.
[4] 王思理，胡冠时，汞立青.细菌内毒素检查法及其应用[M].北京：气象出版社，2003:6,10.
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