一、试验目的：
建立猪瘟活疫苗（传代细胞源）的细菌内毒素检查方法，按现行《中国兽药典》一部附录“细菌内毒素检查法”进行试验并判定结果。
二、试剂和仪器：
鲎试剂（检测限：0.015EU/ml；规格：0.3ml，湛江博康海洋生物有限公司）
细菌内毒素标准品（150601-202191，90EU/支，中国食品药品检定研究院提供）
检查用水（规格：5ml，湛江博康海洋生物有限公司）
猪瘟活疫苗（传代细胞源）（规格：20头份/瓶）
抗增液（规格：2ml，湛江博康海洋生物有限公司）
仪器：细菌内毒素分析仪，型号：BET-24A-48，生产厂家：湛江博康海洋生物有限公司
三、实验：
1、标准
该产品我们检索、查询到相关质量标准2017年版《兽药质量标准》生物制品卷P315，但该标准未收载细菌内毒素检查。
2、供试品前处理
我们首先用5ml兽用疫苗稀释液溶解猪瘟活疫苗制成原始溶液。
3、无干扰稀释倍数的确定
然后按现行《中国兽药典》一部附录“细菌内毒素检查法”进行试验，进行了40倍、80倍和160倍稀释液3次试验。
4、试验结果
试验必须符合以下三个条件方为有效：
① 标准曲线的相关系数（r）的绝对值应大于或等于0.980，试验方为有效；
② 内毒素的回收率要在50%～200%的范围内；
③ 阴性对照的反应时间应大于标准曲线最低浓度的反应时间。
试验结果：
标准曲线的相关系数（r）的绝对值为0.9997符合第一项要求；
阴性对照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间，符合第三项要求；
第二项回收率试验结果见下表：
| 稀释倍数 |
回收率（%） |
判定结果 |
| 40 |
151.1% |
符合要求 |
| 80 |
86.0% |
符合要求 |
| 160 |
59.5% |
符合要求 |
5、讨论
猪瘟活疫苗（传代细胞源）的细菌内毒素检查方法，按现行《中国兽药典》一部附录“细菌内毒素检查法”进行试验其中40倍、80倍和160倍稀释液回收率均符合标准要求；但其中40倍、80倍和160倍稀释液样品管反应曲线形态不符合细菌内毒素二阶反应S型特征，我们判定该检测结果不符合情况，可能是真菌葡聚糖导致的假阳性结果。
6、重复验证
为了屏蔽真菌葡聚糖导致的假阳性，我们使用抗增液按2010年版《中国兽药典》附录“细菌内毒素检查法”对40倍稀释液进行了重复试验。重复试验回收率结果见下表：
| 稀释倍数 |
回收率（%） |
判定结果 |
| 40 |
72.4% |
符合要求 |
重复试验40倍样品管反应曲线形态符合细菌内毒素二阶反应S型特征，我们判定该样品存在真菌葡聚糖导致的假阳性结果，而且使用抗增液可以有效屏蔽真菌葡聚糖导致的假阳性结果。
基于反应曲线形态分析，我们建议使用抗增液屏蔽真菌葡聚糖导致的假阳性，因此，建议选用样品40倍稀释液作为日常检测浓度，并结合抗增液屏蔽真菌葡聚糖导致的假阳性。
四、结论：
猪瘟活疫苗（传代细胞源）细菌内毒素检查：取本品，首先用5ml兽用疫苗稀释液溶解，然后依据现行《中国兽药典》一部附录“细菌内毒素检查法”进行试验，选用样品40倍稀释液作为检测浓度，并结合抗增液屏蔽真菌葡聚糖导致的假阳性。
