韦冬苗 董光宴(审校)
(湛江博康海洋生物有限公司,湛江524094)
注射用盐酸地尔硫卓为无菌冻干品,白色疏松块状物及粉末。通过作用于冠脉血管及末梢血管的心管平滑肌及房室结,抑制Ca2+向细胞内流入,而显示血管扩张作用及延长房室结传导时间的作用,从而对高血压、心律不齐、心绞痛有效。
盐酸地尔硫卓做细菌内毒素检查时回收率偏低,无法正常开展细菌内毒素检查,通过考察发现其回收率与混合时间有关,混合时间越长回收率越低。通过特殊介质处理可以克服该现象,使注射用盐酸地尔硫卓细菌内毒素检查避免假阴性的产生,能客观准确的检测样品中的细菌内毒素含量。
1、作用特点
按照常规方法,对注射用盐酸地尔硫卓进行细菌内毒素定量检测考察,考察结果发现回收率偏低而且不稳定。根据该情况,我们对该品种进行回收率试验分析。
考察因素:回收率、混合时间。
考察方法:定量法回收率试验时,将外加内毒素供试品管(即药典要求B管)按照同样方法平行做5管,每管放置漩涡混合器振荡,按试管编号分别振荡10s、20s、30s、60s和120s,其它操作按药典要求执行。
考察次数:重复3次。
标准曲线:lgT=2.9238-0.2962lgC(相关系数r=0.9916)
考察数据:
第一次考察数据记录
标准曲线相关系数的绝对值大于0.9800,标准曲线有效;阴性对照均未反应、阳性对照检测值分别为理论值的88.8%、101.9%、113.4%,实验数据有效。
考察结果:
盐酸地尔硫卓做细菌内毒素检查时回收率偏低,无法正常开展细菌内毒素检查,通过考察发现其回收率与样品浓度、样品酸碱度无关;与混合时间有关,混合时间越长回收率越低,当混合时间达到120s时回收率最低只有15%,不同的实验室不同实验人员得到回收率有一定的差异,但回收率与混合时间之间的变化趋势均相同,即混合时间越长回收率越低。盐酸地尔硫卓做细菌内毒素检查时回收率偏低,其回收率与样品溶液存放时间是否相关,有兴趣的研究者可以考察。
1、原因分析
注射用盐酸地尔硫卓为无菌冻干品,白色疏松块状物及粉末,其酸碱度为4.5~6.5。考察结果显示其回收率与样品浓度、样品酸碱度无关;与混合时间有关,混合时间越长回收率越低。样品酸碱度为4.5~6.5不会破坏内毒素,酸碱度偏低可能对内毒素与鲎试剂反应产生抑制作用,但这种抑制作用与混合时间没有关系,不会因混合时间延长导致回收率偏低。产生这种情况的可能原因:1、类似吸附性作用,注射用盐酸地尔硫卓将细菌内毒素吸附在其分子结构上,随混合时间延长吸附越充分,从而导致混合时间越长回收率越低;2、类似包合物作用,注射用盐酸地尔硫卓将细菌内毒素包合在其分子结构内,随混合时间延长细菌内毒素进入注射用盐酸地尔硫卓分子内越彻底,从而导致混合时间越长回收率越低;3、其它原因,注射用盐酸地尔硫卓阻碍了细菌内毒素与鲎试剂的反应。
以上可以归纳为,细菌内毒素的溶解竞争问题,即我们必须要克服注射用盐酸地尔硫卓对细菌内毒素的吸附或包合作用,让细菌内毒素游离在溶液中能正常与鲎试剂发生反应,避免细菌内毒素被吸附或包合,导致假阴性产生。
2、解决办法
根据注射用盐酸地尔硫卓与细菌内毒素反应特点,混合时间越长回收率越低,我们在样品溶液中加入一种特殊基质,这种基质能让细菌内毒素游离在溶液中,使细菌内毒素与鲎试剂能正常发生反应,避免细菌内毒素被吸附或包合,解决回收率不稳定偏低的现象。我们对该基质的作用进行考察。
考察因素:回收率、混合时间。
考察方法:定量法回收率试验时(加入基质),将外加内毒素供试品管(即药典要求B管)按照同样方法平行做4管,每管放置漩涡混合器振荡时间不同,将试管编号分别振荡30s、60s、120s和240s,其它操作按药典要求执行。
考察次数:重复2次
标准曲线:lgT=2.9238-0.2962lgC(相关系数r=0.9916)
考察数据:
阴性对照均未反应、阳性对照检测值分别为理论值的126.5%、102.8%,实验数据有效;将基质加入阳性对照分别振荡30s至240s其回收率分别为87.2%、87.6%、102.7%和103.7%,基质对细菌内毒素与鲎试剂的反应无影响,不产生干扰作用,检测结果不随混合时间的变化而变化。
考察结果:
过考察,在注射用盐酸地尔硫卓溶液中加入这种特殊基质达到了预期目的,即使混合240s其回收率也大于75%,符合药典规定。这种基质能让细菌内毒素游离在溶液中,使细菌内毒素与鲎试剂正常发生反应,避免细菌内毒素被吸附或包合,解决回收率不稳定偏低的现象,解决了注射用盐酸地尔硫卓与细菌内毒素混合时间越长回收率越低的问题,解决了注射用盐酸地尔硫卓做细菌内毒素试验遇到的困难,使注射用盐酸地尔硫卓能正常开展细菌内毒素定量检查法。
(本文完)