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应用研究
注射用盐酸克林霉素细菌内毒素检查方法
Date: 2018-10-20 09:25:47
刘雪莉 张敏 李晓利
（河北省药品检验所，河北 石家庄 050011）
摘要：目的 建立注射用盐酸克林霉素的细菌内毒素检查方法。方法 按2005年版《中国药典（二部）》附录ⅪE进行试验并判定结果。结果 供试品溶液质量浓度为3g/L时，对细菌内毒素检查无干扰。结论 注射用盐酸克林霉素用细菌内毒素检查法代替热原检查法可行。
关键词：注射用盐酸克林霉素；细菌内毒素；鲎试剂；干扰试验
注射用盐酸克林霉素是一种适用于链球菌属、葡萄球菌属和厌氧菌所致中、重度感染的抗生素。考虑到细菌内毒素检查法具有成本低、操作简便、灵敏度高等特点，笔者参考有关文献，对注射用盐酸克林霉素进行了细菌内毒素检查法的可行性研究。
1 材料
注射用盐酸克林霉素（海南利能康泰制药有限公司，批号分别为0902131,0901173,0903233，
规格依次为0.6g/支，0.5g/支，0.6g/支）。鲎试剂1（TAL1，湛江博康海洋生物有限公司，批号为0902270，规格为0.1ml/支，λ=0.25EU/ml）；鲎试剂2（TAL2，湛江安度斯生物有限公司，批号为0907011，规格为0.1ml/支，λ=0.25EU/ml）；细菌内毒素工作标准品（CSE，中国药品生物制品检定所，批号为150601-200963，规格为120EU/支）；细菌内毒素检查用水（BET用水，湛江博康海洋生物有限公司，批号为0908030，规格为50ml/支）。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核
按2005年版《中国药典（二部）》附录细菌内毒素检查法进行试验，其灵敏度均在0.5λ～2.0λ范围内，符合规定（表1）
2.2 供试品细菌内毒素限值（L）确定
按本品临床用药“1h内输入的药量不能超过1.2g”计算，M=1.2g/(60kg.h)=20mg/ (kg.h)。根据公式L=K/M计算，L=K/M=5EU/(kg.h)/20mg/（kg.h）=0.25EU/mg。
2.3 供试品有效稀释浓度计算
本试验所用鲎试剂灵敏度均为0.25EU/ml，供试品细菌内毒素限值L为0.25EU/mg，最大有效稀释倍数（MVD）=CL/λ，MVD=1，则C=λ/L=(0.25EU/ml)/（0.25EU/mg）=1g/L。
2.4 供试品干扰预实验
将注射用盐酸克林霉素（批号为0902131）按表2浓度稀释成供试品管（NPC）和含有2λ浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管（PPC）。取两个不同厂家的鲎试剂，分别置上述NPC和PPC进行反应用，每个浓度平行做两支，另分别做阴性对照管（NC）与阳性对照管（PC）各两支，于37℃±1℃保温（60±2）min。由表2可见，注射用盐酸克林霉素质量浓度不小于12g/L（pH介于4.60与4.46之间）时对两个厂家鲎试剂均有干扰作用，质量浓度不大于6g/L（pH介于4.65与5.33之间）时对两个厂家鲎试剂均无干扰作用。
2.5 供试品干扰试验
根据预试验，将质量浓度为6g/L的供试品溶液进行干扰试验。由表3可见，3批供试品质量浓度为6g/L时，Et均在0.5Es～2Es范围内，可认为在此浓度下供试品无干扰作用。但考虑到后两批供试品Et与Es相差较大，选定3g/L的供试品重新进行干扰试验（表4）。结果表明，3批供试品质量浓度为3g/L（即3倍最低有效浓度）时Et与Es完全一致，对鲎试剂无干扰作用。
2.6 样品检测
分别取4个厂家19批注射用盐酸克林霉素，将样品稀释至1g/L（即最低有效浓度），以灵敏度0.25EU/ml的TAL1按2005年版《中国药典（二部）》附录细菌内毒素检查法进行检测，结果见表5。可见，19批样品细菌内毒素检查均符合规定，与热原检查结果一致。
3 讨论
试验结果表明，注射用盐酸克林霉素采用细菌内毒素检查代替热原检查是有效且可行的。注射用盐酸克林霉素细菌内毒素检查限值可规定为：取本品，依据2005年版《中国药典（二部）》附录Ⅺ E，检查每1mg克林霉素中含内毒素的量应小于0.25EU。
《药物鉴定》2011年第20卷第21期
