韦冬苗（综述） 董光宴（审校）

（湛江博康海洋生物有限公司，湛江524094）

    从中国药典1990版收载细菌内毒素检查法至今已有二十多年。正确理解药典内容非常重要，本文是笔者对细菌内毒素检查法的理解或想法，认为有必要对这些相关问题加以探讨，以供参考。
1. 鲎试剂的灵敏度值与样品细菌内毒素限值一致进行试验是最佳选择吗？如10%葡萄糖注射液选用0.50EU/ml的鲎试剂，注射用水选用0.25EU/ml的鲎试剂。
    不是！选择鲎试剂的灵敏度值等于样品原液细菌内毒素限值进行试验，从一般的认识角度看，其唯一好处是可以节省对样品的稀释。但其不利之处有二：①因供试品溶质浓度和PH值等因素影响，增加了供试品阳性对照（PPC）管操作的难度；②无法避免样品原液如药液中保留了过滤材料、或不可预见的管道溶出物等因素可能造成供试品阳性对照（PPC）管不凝的情况，导致试验无效，结果“最佳方案”反而造成时间、试剂、药品等的浪费，耽误工作。做过细菌内毒素检查试验的同志都知道，倍倍稀释法是做供试品阳性对照（PPC）管最简便、最规范的方法。因此，综合试剂成本、试验操作规范等因素，减少样品溶液对细菌内毒素试验的干扰，建议选择更灵敏的鲎试剂如0.125EU/ml，并对样品原液作适宜稀释后进行试验。
2、细菌内毒素检测取样量/检验量是多少？
    内毒素检査的样品除另有规定外，一般采取随机抽样原则进行取样。随机抽样中，对分批应特别注意。对于一个配制批次分多个灭菌柜/次灭菌的情况，通常应对各个灭菌柜/次分别取样，进行内毒素检查。
内毒素检查中实际遇到过，同一批检品但不同瓶用同一厂家的同一批鲎试剂检查结果不同，而且即使换人及换鲎试剂进行检查这种不同的结果仍可重复。排除操作对样品污染的可能后，对样品进行细菌内毒素污染量测定，发现两瓶大输液之间的细菌内毒素污染量相差4倍以上。可见细菌内毒素污染的瓶间差异客观存在。这一现象也提示我们，限于抽样原则，内毒素检查无法有效发现低污染概率的缺陷，在遵循随机取样的原则下，还应考虑产品生产工艺、及内毒素污染的方式，抽取典型时间节点的产品进行检验，可避免热原反应的漏检。
3、细菌内毒素检查用水，是必须购买的吗？
    2010年版《中国药典》凡例第二十二条规定“试验用水，除另有规定外，均系指纯化水。”同时2010年版《中国药典》及《中国药品检验标准操作规范》明确规定，细菌内毒素检查实验必须使用“细菌内毒素检查用水”，那么试验中我们就不能用灭菌注射用水代替“细菌内毒素检查用水”。细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml（凝胶法）或0.005EU/ml（光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
细菌内毒素检查用水与灭菌注射用水比较有以下区别：
    3.1  内毒素含量：灭菌注射用水要求较低0.25 EU/ml，本公司细菌内毒素检查用水要求内毒素﹤0.003 EU/ml。细菌内毒素检查用水用于试验，无论凝胶法还是定量法其内毒素可以忽略不计，但灭菌注射用水由于内毒素标准要求较低，其内毒素不能忽略。灭菌注射用水用于鲎试验，由于灭菌注射用水与样品中内毒素的叠加可能造成假阳性结果，给企业带来不必要的经济损失。
    3.2  pH值：灭菌注射用水pH值要求5.0～7.0，本公司细菌内毒素检查用水要求pH值要求5.0～7.0。
    3.3  无干扰作用：细菌内毒素检查用水要求对内毒素试验无干扰作用，而灭菌注射用水无此标准要求。灭菌注射用水可能有抑制作用，造成假阴性结果，有时内毒素超标而未检出，由于漏检导致的输液反应可能给企业带来灭顶之灾。
4、注射用水细菌内毒素检查需每批都做供阳对照吗？
    要做的，供阳的作用是为了核实供试品中是否有抑制鲎试剂凝聚的物质，以证明供试品溶液的结果准确。注射用水是生产注射药品的溶媒，我们必须保证注射用水内毒素检测结果的准确可靠。如果不做供试品阳性对照，一旦出现假阴性，我们无法预知，生产出来的成品中内毒素是否合格？成品生产出来仍然没有发现假阴性，不合格产品流入市场造成严重输液反应，将直接威胁临床患者的生命安全。
5、细菌内毒素工作品用检查用水稀释后，实验剩下的可以保存再利用吗？
    稀释后的内毒素溶液静置时间超过10分钟，使用前应在旋涡混合器上重新振摇1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。稀释后的内毒素溶液效价较低，长期放置其效价通常会下降，因此再次使用时，实验结果可能会有偏差，一般情况下，内毒素工作品价格不贵，不建议保存后再利用。
    总结:要保证细菌内毒素检查结果的准确性，简单来说做好三个方面工作：①首先要保证实验器材可靠，否则实验是百分之百失败；②保证标准品稀释准确，才能保证实验结果准确；③加样准确，这是实验的基础，没有这个基础，实验准确性、药典规定、SOP等无从谈起。
    细菌内毒素检查项关系到人的生命安全，药典和SOP对其实验过程有严格的规定，每位从业人员应该对其仔细阅读，深刻理解，应对鲎试验反应原理、影响因素等有比较深入了解，这样才能解决试验中出现的问题，保证实验结果准确，确保伤病员用药安全。
 

（本文完）

作者单位：湛江博康海洋生物有限公司