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宫入菌对急性坏死性胰腺炎大鼠肠道细菌移居的作用
吴
恺
王冰娴
王兴鹏
上海市第一人民医院消化科
消化疾病研究室
上海市
200080
吴恺，男，1968-08-28生，浙江省湖洲市人，汉族.
1990年上海医科大学检验系毕业，现为上海市第一人民医院消化科、
消化疾病研究室主管技师.
部分系上海市科学技术委员会科技启明星计划资助课题，No.99QB14009
项目负责人
王兴鹏，200080，上海市，上海市第一人民医院消化科、消化疾病研究室.
Department of Gastroenterology, Laboratory for GI Diseases, Shanghai First
People＇s
Hospital, Shanghai 200080,
China
Correspondence to
Xing-Peng
Wang, Department of Gastroenterology, Shanghai First
People＇s
Hospital, Shanghai 200080, China
Tel. 0086-21-63240090, Fax.
0086-21-63240825
Email. xpwcn@public7.sta.net.cn
收稿日期
2000-04-24
接收日期
2000-05-22
Effects of clostridium butyricum on bacterial translocation in rats with
acute necrotizing pancreatitis
Kai
Wu, Bing-Xian Wang and Xing-Peng Wang
Abstract
AIM
To
evaluate the effects of clostridium butyricum on bacterial translocation in rats
with acute necrotizing pancreatitis (ANP).
METHODS
Twenty-seven
SD rats were assigned to three groups randomly, including sham-operation, ANP
without treatment and ANP treated with clostridium butyricum. ANP model was made
by injection of 5% sodium tarucholate into the bilio-pancreatic duct.
Pathological changes in pancreas and ileum were studied. Serum lipase and
amylase activities and serum endotoxin were determined. Bacterial culture in
pancreas, liver, spleen and mesenteric lymph nodes (MLN) were made. Changes in
intestinal bacterial flora and sIgA were investigated.
RESULTS
Serum
amylase and lipase activities were decreased in clostridium butyricum treated
rats (5528±1195)nkat·L-1,
(495±129)nkat·L-1
compared with ANP group (9091±1901)nkat·L-1,
(1677±391)nkat·L-1
(P＜0.05).
Serum endotoxin level was increased in ANP group (0.067±0.012)EU·L-1,
but decreased in clostridium butyricum treated rats (0.039±0.011)EU·L-1
(P＜0.05).
Clostridium butyricum could regulate the imbalance between intestinal anaerobic
bacteria and aerobic bacteria in ANP rats. The
B/E
ratio was 1.53±0.31
in ANP group, but increased to 1.96±0.21
in clostridium butyricum group. The incidence of bacterial translocation in ANP
(80%) was reduced by clostridium butyricum treatment (37.5%). Intestinal sIgA
was increased in ANP, but decreased in clostridium butyricum treatment.
Pathological changes in pancreas and ileum were ameliorated by administration of
clostridium butyricum.
CONCLUSION
Clostridium
butyricum could improve the outcome of rats with ANP, Owing to its action of
inhibiting intestinal bacterial translocation.
Subject
headings
Pancreatitis/acute;
intestinal bacterial translocation;
clostridium butyricum
Wu
K, Wang BX, Wang XP. Effects of clostridium butyricum on bacterial translocation
in rats with acute necrotizing pancreatitis.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,
2000;8(8):883-886
摘要
目的
观察宫入菌（米雅BM）对实验性急性坏死性胰腺炎（ANP）肠道细菌移居的影响.
方法
SD大鼠随机分成三组，对照组、ANP组和ANP米雅BM处理组.
ANP大鼠模型制备采用胰胆管内注射5％牛磺胆酸钠溶液.
观察胰腺及肠道病理形态学改变，血清淀粉酶和脂肪酶活性变化，血清内毒素水平，脏器细菌培养，肠道细菌菌群变化及肠道sIgA含量.
结果
ANP组血清淀粉酶、脂肪酶活性为(9091±1901)nkat·L-1，(1677±391)nkat·L-1，较对照组〔(2588±291)nkat·L-1，(121±30)nkat·L-1〕明显增高，P＜0.05；米雅BM处理组血清淀粉酶、脂肪酶活性分别为(5528±1195)nkat·L-1，(495±129)nkat·L-1，较ANP组显著下降，P＜0.05.
米雅BM处理组血清内毒素水平为(0.039±0.011)EU·L-1，较ANP组〔（0.067±0.012)EU·L-1〕显著降低.
米雅BM能显著纠正业已紊乱的肠道菌群，促进肠道有益菌生长，抑制过度繁殖的大肠杆菌等有害菌生长，显著提高肠粘膜双歧杆菌/大肠杆菌(1.96±0.21
vs
1.53±0.31)，从而控制肠道细菌移居，脏器细菌培养阳性率显著下降（37.5%
vs
80%）.
肠道sIgA含量在ANP组为(42±18)pg/g，而米雅BM处理组〔(20±4)pg/g〕低于ANP组.
米雅BM能显著减轻胰腺及肠道粘膜病理形态损害.
结论
米雅BM可通过调节肠道微生态紊乱，保护肠粘膜屏障，控制ANP状态下肠道细菌和毒素移居，从而改善ANP肠道及胰腺病理损害.
主题词
胰腺炎/急性；肠道细菌移居；宫入菌
吴恺,
王冰娴,
王兴鹏.
宫入菌对急性坏死性胰腺炎大鼠肠道细菌移居的作用.
世界华人消化杂志，2000；8(8)：883-886
0
引言
严重的胰腺和胰周组织继发感染及其并发的多器官功能衰竭是影响急性坏死性胰腺炎(acute
necrotizing pancreatitis, ANP)预后的主要限制性因素［1-7］.
预防和控制感染及其由此引起的全身炎症反应综合征(systemic
inflammatory response syndrome, SIRS)为ANP救治过程中的主要目标.
近年来，临床观察和实验研究结果表明，肠道细菌和内毒素的移居参与了ANP继发感染和SIRS的发生，其主要的原因为肠粘膜的损伤和肠道细菌过度繁殖所造成的菌群紊乱［8-15］.
因此调节肠道微生态变化应有利于控制肠道细菌和毒素的移居.
我们应用微生态（活菌）制剂宫入菌（商品名米雅BM）观察其对实验性急性坏死性胰腺炎大鼠肠道菌群的调节作用，探讨其对细菌和毒素移居的影响.
1
材料和方法
1.1
材料
♂
Spraque-Dawley (SD)大鼠27只，体质量250g～280g，购自上海市必凯实验动物中心，实验前在本实验室予标准饲料和水饲养1wk.
牛磺胆酸钠购自Sigma公司，实验前用去致热原水配制成5％的溶液.
内毒素试剂盒由上海医学化验所提供.
淀粉酶和脂肪酶试剂盒购自Randox公司.
SIgA试剂盒由北京中国原子能研究所提供.
1.2
方法
ANP动物模型制备：实验前禁食12h，不禁水.
10g·L-1巴比妥钠溶液ip麻醉.
严格消毒、铺巾，正中线剖腹，置管于胆胰管内，在微量输液泵的控制下向胆胰管内注射50g·L-1牛磺胆酸钠溶液，剂量1mL·kg-1，留置导管5min后拔管.
假手术组大鼠仅作剖腹术.
术后自由饮水.
大鼠随机分成3组：对照组(N=9)、ANP组(N=10)和ANP米雅BM治疗组(N=8)，术前胃饲法每天给米雅BM
60mg（含15×107个活性宫入菌），共5d，术后胃饲1次.
术后24h处死大鼠，无菌采取下腔静脉血，分别用于测定：①内毒素,采用鲎试剂基质显色定量法，单位Eu·L-1；②淀粉酶和脂肪酶活性，酶动力学法，单位nkat·L-1.
无菌取肝、胰、脾及肠粘膜淋巴结约0.5g，同时刮取小肠粘膜约0.2g，加入一定量灭菌生理盐水，匀浆后接种于需氧菌、厌氧菌平板.
需氧菌37℃培养24h后观察，厌氧菌37℃培养48h后观察结果，根据细菌生长特点、菌落和生化反应等分别鉴定需氧菌和厌氧菌.
采集盲肠内容物，加入生理盐水混匀，4℃冰箱振荡过夜，次日离心取上清，用双抗体PEG放射免疫法测定SIgA含量，同时测定上清液总蛋白浓度（TP），SIgA质量浓度用pg/g·protein表示.
取胰腺和回肠组织，100mL·L-1福尔马林溶液固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察.
统计学处理
结果以x±s表示，数据统计采用T检验和χ2检验.
2
结果
2.1
大体病理形态学所见
ANP组，胰腺明显肿大、充血，有灶性坏死.
肠粘膜有散在出血点，颜色变黑；ANP米雅BM组，胰腺水肿减轻，未见灶性坏死.
肠粘膜外观水肿明显.
光镜观察：ANP组，胰腺间质出血、大量炎性细胞浸润，腺泡细胞大片坏死.
肠绒毛顶端破损，间质有大量炎症细胞浸润，水肿；ANP米雅BM组，胰腺灶性坏死减少，间质轻度水肿，少量炎性细胞浸润.
肠粘膜上皮绒毛尚完整，间质水肿，炎症细胞浸润减少(图1，2).
2.2
血清淀粉酶、脂肪酶活性
ANP制备后，血清淀粉酶、脂肪酶活性较对照组显著升高，而米雅BM处理组较ANP非处理组显著降低
（表1）.
图1
胰腺组织学变化.
A：ANP非治疗组
B：ANP米雅治疗组.
HE×200
图2
回肠组织学变化.
A：ANP非治疗组
B：ANP米雅治疗组.
HE×200
2.3
肠内容物SIgA含量
测定盲肠内容物SIgA含量，对照组为(23±10)pg·g-1,ANP组为(42±18)pg·g-1,显著高于正常对照组(P.01)；而米雅处理组为(20±4)pg·g-1,显著低于ANP组(P＜0.01)，而与正常对照组相比无显著差异(P＞0.05).
2.4
血清内毒素水平
ANP组内毒素水平(0.067±0.012)EU·L-1，明显高于对照组(0.033±0.008)EU·L-1，而米雅BM处理组(0.039±0.011)EU·L-1,则较ANP组显著降低(P＜0.05).
2.5
脏器细菌移居发生率
对照组除2例肠系膜淋巴结检出细菌外，余脏器均为阴性.
ANP组中总阳性率达80％，米雅BM组阳性率为38％（表2）.
2.6
肠道细菌菌群分析
对照组中大肠杆菌和厌氧菌均检出，ANP组中大肠杆菌大量生长，厌氧菌生长受到明显抑制；米雅BM显著促进厌氧菌生长(表3).
表1
各组ANP血清淀粉酶和脂肪酶结果(nkat·L-1)
|
组别
|
淀粉酶
|
脂肪酶
|
|
对照组
|
2588±291
|
122±30
|
|
ANP组
|
9091±1901b
|
1677±391b
|
|
米雅BM组
|
5528±1195d
|
495±129d
|
bP＜0.01
vs
对照组；
dP＜0.01
vs
ANP组.
表2
各组ANP脏器细菌培养结果
|
组别
|
N
|
肝
|
胰
|
脾
|
MLN
|
总阳性例数(%)
|
|
对照组
|
9
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0
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0
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0
|
2
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