非细菌内毒素反应曲线的发现
湛江博康海洋生物有限公司用本企业研制生产的定量鲎试剂第一家准确无误地检测出了内毒素与葡聚糖二者之间的区别,并公布了内毒素与非内毒素反应曲线。截止目前,还没有第二个品牌的鲎试剂将假阳性区别出来,其他国内外研究机构也未公布同类型曲线。
湛江博康海洋生物有限公司对于假阳性的鉴别已经远远走在了世界同行业的前面。
鲎试剂的特异性系指在药品、生物制品和血液制品中鲎试剂能准确测出被测物质内毒素的能力,既不能造成样品内毒素的漏检,也不能将其它物质错判为内毒素。目前我公司研究证明,已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖。中国药品生物制品检定所夏振民报道除(1-3)-β-葡聚糖外,(1-4)、(1-6)-β-葡聚糖同样使鲎试验产生阳性结果,这些物质的总称为真菌多糖,普遍存在于真菌细胞壁。如果这类物质具有像内毒素一样的致热活性,细菌内毒素检查和热原检查结果的符合率会接近一致,但是真菌多糖不是一种致热物质。这将导致在使用普通鲎试剂检测这些样品时,出现细菌内毒素检查不合格,热原检查合格的现象,造成对这些物质热原检查的错判(假阳性),将其它物质错判为内毒素,造成企业直接经济损失。
判断假阳性的方法:
1、特异性鲎试剂法。特异性鲎试剂经特殊的工艺改造,只与细菌内毒素发生凝胶反应,阻断了β-葡聚糖生成凝胶的反应,避免假阳性的形成。本公司的鲎试剂特异性好,对药品中超量的细菌内毒素分辨率为100%,只与细菌内毒素发生凝胶反应,不与β-葡聚糖生成凝胶反应,避免假阳性的形成,避免将合格药品判为不合格而造成企业的经济损失;同时可避免因样品内毒素的漏检,造成临床用药的不良反应,保证患者用药安全。
2、定量反应曲线分析法。细菌内毒素、β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应的区别:定量鲎试剂与细菌内毒素反应曲线为规则S型特征曲线,β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应曲线为经过0点的斜线或不规则曲线;定量鲎试剂与细菌内毒素为变速反应,反应速度先慢然后变快最后又变慢,β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应基本是恒速。通过观察定量反应的反应曲线及反应速度可以区分细菌内毒素和β-葡聚糖样物质。

内毒素反应曲线
非内毒素反应曲线
该反应曲线能直观的判断内毒素反应类型,我公司用本企业研制生产的定量鲎试剂第一个准确无误地检测出了二者之间的区别,并公布了内毒素与非内毒素反应曲线,其他鲎试剂产品还不能将假阳性区别出来,相应研究机构到目前还未公布同类型曲线。
2003年山东省某制药厂生产的5%葡萄糖注射液(规格:100ml
产品批号:0307040101)内毒素限量是合格的,但是用福州某公司的鲎试剂检验却是阳性。我们用特异性鲎试剂法、定量反应曲线分析法对这批产品的反应数据、反应曲线和反应速率曲线进行研究分析,确认该批药品细菌内毒素合格,为假阳性反应,为该制药厂挽回了经济损失。
2004年,我们广东省某制药企业生产的Vc注射液也发现含有β-葡聚糖的假阳性反应现象。
2006年,上海市某制药公司用福州某公司的鲎试剂出现聚丙烯添加剂溶出物假阳性反应问题。我们用特异性鲎试剂法、定量反应曲线分析法对该制药公司塑瓶装5%葡萄糖注射液进行分析,最终确认为聚丙烯添加剂溶出物假阳性反应,解决了该企业正常开展细菌内毒素检查工作的问题。